摘要
反转录聚合酶链反应( R T- P C R) 扩增鸡传染性支气管炎病毒( I B V) 中国流行株( H D)的主要免疫原纤突蛋白 S1 基因( Spike protein gene) ,将其插入载体p U C18 的 Bam HⅠ/ Hind Ⅲ位点,在大肠杆菌中实现目的基因的分子克隆。经克隆化 S1 基因的限制性酶切片段多态性( R F L P)分析和 Southern 杂交之后,双脱氧链终止法测定其5′端高变区核苷酸序列,并以此与 Gene Bank 中的参考毒株 Massachussetts41 相应序列作比较,分析其同源性。在此基础上,分别以此两毒株抗原研制灭活疫苗,交叉免疫攻毒。结果表明,从 S1 基因5′端高变区的起始密码子 A T G 至第350 位,两毒株仅在起始密码子后第131 位存在一个碱基的点突变,由 M41 的 C 突变为 H D 株的 G,即 S1蛋白上的第41 个氨基酸由 M41 的 Ala 突变为 H D 株的 Gly ,二者核苷酸同源率为997 % ,氨基酸同源率为991 % 。两毒株灭活抗原疫苗免疫后的交叉攻毒试验表明, M41 毒株疫苗对 H D 株的保护率为75 % ,而 H D 株疫苗对 M41 株的保护率只有65 % 。
After cloning and identification of the gene encoding spike l protein of the avian infectious bronchitis virus(IBV) HD isolate of China, the sequence of the 5' end within the hypervariable region (HVR) of the S1 gene was analyzed, and compared with the corresponding sequence of the IBV standard M41 strain from the GeneBank. One bp site mutation on the analyzed sequence was found between M41 and the HD strains, which was located at the 350nt after ATG, i. e. the Gly in HD replaced for Ala in M41 at the 41 amino acid residue of S1 glycoprotein. Cross protection between two vaccine strains showed that significant different protective effect can be induced by the site mutation on 5' end within the HRV of the S1 gene on the immunogenicity of IBV.
出处
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
1999年第3期249-251,共3页
Chinese Journal of Virology
基金
国家攀登计划 B 类项目
关键词
鸡
传染性支气管炎
病毒
免疫原基因
点突变
ywords: Avian infectious bronchitis virus, Immunogen gene, HVR, Site mutation, Immunogenicity