棉铃虫核型多角体病毒p35基因的PCR扩增和克隆及其在原核细胞中的表达

PCR AMPLIFICATION, IDENTIFICATION OF p35 GENE FROM HaNPV AND ITS CLONING AND EXPRESSION IN PROKARYOTIC CELLS

用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ Ａｃ Ｎ Ｐ Ｖ） 凋亡抑制基因ｐ３５ 的合成引物，从棉铃虫核型多角体病毒（ Ｈａ Ｎ Ｐ Ｖ） 基因组中用 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增到了１ｋｂ 片段。采用 Ｐ Ｃ Ｒ－ 双脱氧核苷酸链终止银染法，测定了所扩增到的１ ０１０ｂｐ 全序列，发现其开放阅读框完整，长８９７ｂｐ ，编码２９９ 个氨基酸。用 Ｄ Ｎ Ａ Ｓ Ｉ Ｓ 和 Ｐ Ｒ Ｏ Ｓ Ｉ Ｓ 软件分析发现，此片段与 Ａｃ Ｍ Ｎ Ｐ Ｖ ｐ３５ 基因同源区核苷酸同源性为９１ ％ ，氨基酸同源性也达８１ ％ ，证明了所扩增的片段是 Ｈａ Ｎ Ｐ Ｖ 的ｐ３５ 基因。为了研究此ｐ３５ 基因的功能及其效应机制，克隆了这一基因并在大肠杆菌细胞中实现了表达。

By using primers designed from the flanking sequence of AcNPV p35 gene coding region, a 1kb fragment is produced by PCR from HaNPV DNA. After cloning, we sequenced both the 5' and 3' ends, and identified that this 1kb fragment is the p35 gene of HaNPV. We have cloned and expressed the gene in E.coli cells and got high level yielding of the protein. This preliminary result needs further studies.