带有GFP标签的汉滩病毒糖蛋白表达载体的构建

目的:构建带有绿色荧光蛋白(GFP)标签的汉滩病毒(HTNV)包膜糖蛋白(GP)真核表达载体,并进行初步表达鉴定。方法:以peGFP-C1质粒为模板扩增GFP片段,将其插入真核表达载体pFLAG-CMV3中,构建成可表达带有GFP标签分泌型蛋白的载体pFLAG-CMV3-GFP。扩增HTNV-G1、HTNV-G2,分别插入上述载体,转染293T细胞,采用检测GFP标签蛋白的夹心ELISA法检测转染细胞培养上清中分泌型重组蛋白的含量。结果:酶切及测序证实带有GFP标签的HTNV-G1、HTNV-G2表达载体构建成功,分别命名为pFLAG-G1-GFP/pFLAG-G2-GFP,转染细胞的培养上清中可以检测出带有GFP标签的融合蛋白。结论:成功构建了带有GFP标签HTNV-GP的重组质粒并成功表达,为深入研究HTNV感染后机体针对HTNV-GP的特异性免疫应答规律奠定了实验基础。