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人单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2基因shRNA载体的鉴定和表达

Identification and expression of shRNA vectors targeting human AMPKα2
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摘要 目的构建针对人单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2(AMPKα2)基因的pGPU6/GFP/Neo-shRNA表达载体,转染SH-SY5Y细胞株,观测其对AMPKα2基因的沉默效果。方法利用Ambion在线设计软件设计针对人AMPKα2基因的shRNA干扰序列,克隆到pGPU6/GFP/Neo质粒载体上。对重组质粒进行DNA序列测定和酶切分析。用质脂体将重组质粒转导SH-SY5Y细胞株,经G418筛选阳性克隆后用RT-PCR和Western blot法检测AMPKα2的mRNA和蛋白表达水平。结果经DNA测序和酶切鉴定表明,4个shRNA表达载体构建成功。4个重组质粒之一的pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2(3)能有效抑制AMPKα2基因在SH-SY5Y细胞株中的表达,抑制率为63%。结论成功构建了针对人AMPKα2基因的shRNA表达载体pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2。pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2(3)能有效抑制AMPKα2基因在SH-SY5Y细胞株中的表达,为将来应用其研究AMPK在细胞损伤中的作用奠定了基础。 Objective To construct pGPU6/GFP/Neo-shRNA expression vector targeting human AMPKα2 gene and evaluate its silencing effect in SH-SY5Y cell line. Methods The oligonucleotides designed by Ambion online CAD software targeting AMPKα2 were cloned into the pGPU6/GFP/Neo vector.
作者 卢俊 徐世元 崔睿 张庆国 雷洪伊
机构地区 南方医科大学珠江医院麻醉科
出处 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期86-89,共4页 Journal of Southern Medical University
基金 国家自然科学基金(30972843)~~
关键词 局麻药 RNAi干扰 单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2 local anesthetic RNA interference AMPK
分类号 Q789 [生物学—分子生物学]
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参考文献14

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南方医科大学学报
2011年 第1期

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