斜纹夜蛾核型多角体病毒ⅡORF59基因克隆及原核表达

斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ(Spodoptera lituramulticapsid nucleopolyhedrovirus,SpltMNPVⅡ)是一种新发现的繁殖率和毒力极强的病毒株,其全基因组序列已经测定,共149个ORFs。对SpltMNPVⅡBV和ODV的质谱分析表明,ORF59位于ODV中,是一个功能未知的ORF。本研究根据SpltMNPVⅡORF59基因序列设计引物,经PCR扩增,克隆了ORF59基因。核苷酸序列分析表明,克隆片段上游具有4个TATA box,一个早期启动子CAGT和一个晚期启动子ATAAG。读码框含645 bp,编码214个氨基酸的蛋白质,推定分子量为25.4 ku。将ORF59片段克隆至原核表达载体pET-28a(+),经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21中融合表达,SDS-PAGE分析表明在约29 ku处有特异性表达条带,经Western blot验证该蛋白即为融合表达的目的蛋白。融合表达产物经纯化后,免疫新西兰大白兔获得ORF59多克隆抗体。上述结果为深入研究ORF59的结构与功能提供基础。