人核心蛋白聚糖基因靶向肺癌细胞特异性表达载体的构建及鉴定

目的构建调控人核心蛋白聚糖(DCN)基因特异性基因表达载体,为进一步应用该基因进行肺癌靶向治疗的研究奠定实验基础。方法利用特异性引物,应用PCR技术从人外周血基因组中扩增肺癌细胞特异性表达的人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂的启动子,利用基因重组技术将该启动子插入真核细胞表达载体pcDNA3.1(+),替换该载体的CMV启动子与增强子序列,从而构建成由人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂基因的启动子启动基因表达的基因表达载体。将人DCN基因通过基因重组技术插入到上述载体人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂基因启动子的下游,PCR产物通过测序鉴定核苷酸序列,重组载体通过限制性酶切进行鉴定。结果 PCR扩增的人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂的启动子片段长度为1 250bp;该启动子经测序获得的核苷酸序列与GenBank上该基因上游5′末端转录调控区的序列完全一致;重组载体的酶切鉴定结果显示该启动子成功插入到pcDNA3.1(+)载体,并替换CMV启动子与增强子序列,人核心蛋白聚糖基因成功插入该载体。结论成功构建由人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂基因启动子调控人核心蛋白聚糖基因表达载体。