NR2B反义寡核苷酸对大鼠脊髓星形胶质细胞体外分泌TNF-α及释放谷氨酸的影响

目的:观察N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)反义寡核苷酸对体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞(AST)分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α及释放谷氨酸(Glu)的影响。方法:取新生2～3d新生的SD大鼠L4～6脊髓背角AST细胞原代纯化培养,C组:正常对照,除加入与干预组等量的培养液外不加任何药物;脂多糖(LPS)组:在培养液中加入LPS,终浓度为1mg/L,孵育24h;SNR2B组:在培养液中加入经lipofectamine2000处理的NR2B反义寡核苷酸,终浓度为2μmol/L,孵育48h后再加入LPS,终浓度1mg/L,再孵育24h;ANR2B组:在培养液中加入经lipofectamine2000处理的NR2B正义寡核苷酸,终浓度为2μmol/L,孵育72h后再加入LPS,终浓度1mg/L,孵育24h;5000r/min离心15min后取上清液和细胞,分别用于TNF-α、Glu和NR2B mRNA检测。应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中TNF-α的浓度;用高效液相色谱仪测定Glu含量,RT-PCR检测NR2B mRNA的表达。结果:与C组比较,LPS组和ANR2B组释放的TNF-α和Glu显著增加(P<0.01),而SNR2B组无显著变化;与LPS组和ANR2B组相比,SNR2B组释放的TNF-α和Glu减少(P<0.01)。与C组比较,LPS组和ANR2B组AST细胞的NR2B mRNA的表达显著升高(P<0.01),而SNR2B组差异无显著性。结论:NR2B反义寡核苷酸下调脊髓AST细胞NR2B mRNA表达,减少TNF-α和Glu的释放。