一种改良的半定量RT PCR方法

选用细胞因子ＩＬ４ 为靶基因， 以β肌动蛋白（βａｃｔｉｎ） 基因作为内参照， 将两者在同一ＰＣＲ体系中扩增， 分析ＰＣＲ扩增的动力学， 内参照βａｃｔｉｎ 的引物于ＰＣＲ扩增中的滞后加入， 弥补了ＩＬ４ 与ＲＴＰＣＲ模板量的差异， 使二者的扩增同时处于指数扩增期， 其扩增产物均可在溴乙锭染色的聚丙烯酰胺胶上检测出， 从而可求出ＩＬ４ 的ｃＤＮＡ 拷贝数占βａｃｔｉｎ拷贝数的百分比。重复实验的ＣＶ 值在１０％ 以内， 表明此半定量ＲＴＰＣＲ 方法的可靠性。