棉花黄萎病菌gDNA提取方法和不同单孢的RAPD分析

Studies on methods of gDNA extraction and RAPD analysis of cotton Verticillium wilt pathogen

选用棉花黄萎病菌代表性的菌系 Ｖａ（ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ａｌｂｏａｔｒｕｍ 的一个菌株） 和 Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ 的落叶型菌系 Ｖ Ｄ－８ ， Ｔ９ 及非落叶型菌系 Ｊｙ（ 致病力较强的泾阳菌系） ，以 Ｋｅ（ 致病力较弱的库尔勒菌系） 作为实验对象，研究了 Ｃ Ｔ Ａ Ｂ 和氯化苄２ 种提取方法的优劣．结果表明： Ｃ Ｔ Ａ Ｂ 法比氯化苄法提取的 Ｄ Ｎ Ａ 片段长（５０ｋｂ） ，纯度高（ Ｏ Ｄ２６０／ Ｏ Ｄ２８０ ＝ １５６） ，且稳定、无污染，适合于常规分子生物学研究；该提取方法中 Ｅ Ｄ Ｔ Ａ， Ｎａ Ｃｌ 和β巯基乙醇的最佳配比为１０ ｍ ｍｏｌ，１４ ｍｏｌ 和２ ％ ．利用提取的５ 个菌系的ｇ Ｄ Ｎ Ａ 对 Ｏ Ｐ Ｙ 及 Ｏ Ｐ Ｂ 两组引物进行了筛选，１６ 个引物可以扩增出多态性的谱带．利用引物对 Ｖａ 菌系的４ 个单孢进行的 Ｒ Ａ Ｐ Ｄ 分析，从分子水平证明了不同单孢之间发生变异的可能性．

The study on the methods of DNA extraction showed that CTAB method is better than PhCH 2Cl method. DNA extracted by CTAB method has longer fragment, higher purity, better stability, and less pollution. So it is suitable for the conventional DNA extraction of cotton Verticillium wilt pathogen. The primers screening of RAPD analysis has been performed with 40 primers (OPY, OPB) and 16 primers amplified polymorphic DNA patterrn. RAPD analysis of different single spores also proves that the genetic variation may occur among different single spore from one species.