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乙型脑炎病毒E基因Ⅰ、Ⅱ抗原域片段的克隆与原核表达 被引量：2

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摘要 根据Genebank公布的乙型脑炎病毒E蛋白基因的序列设计并合成一对特异性引物,以pMD18-T-JEV-E质粒为模板,通过PCR扩增E蛋白抗原Ⅰ、Ⅱ基因片段,所得基因纯化后与PGEX-4T-1同时双酶切并重组构建PGEX-JEV-E12质粒,经过测序确定插入编码框正确后经异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导,观察不同诱导时间、不同IPTG浓度对表达的影响,优化反应条件,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和蛋白免疫印迹进行分析.结果通过测序证明重组质粒正确插入读码框成功,转化至感受态细胞中以包涵体形式表达,37℃时最佳诱导条件的反应条件为IPTG浓度0.6mmol/L,诱导时间为8 h;蛋白免疫印迹显示,重组表达蛋白和单抗、多抗均能进行中和反应,无非特异性表达.表明表达蛋白具有良好的抗原性,为进一步进行分析E蛋白基因结构与功能的关系、研制新型ELISA诊断试剂和开发基因工程疫苗奠定了基础.
作者 冯若飞 李向茸 韦鹏建 樊得英 李明生 乔自林 马忠仁
机构地区 西北民族大学生物工程与技术国家民委重点实验室 甘肃省动物细胞工程技术研究中心
出处 《西北民族大学学报（自然科学版）》 2011年第1期68-72,共5页 Journal of Northwest Minzu University(Natural Science)
基金 甘肃省中青年科技基金计划项目(0806RJYA008)
关键词 乙型脑炎病毒 E蛋白基因 抗原域 克隆 表达
分类号 Q599 [生物学—生物化学]
  • 相关文献

参考文献8

  • 1Kolaskar A S,Kulkarni-kale U.Prediction of there-dimension-al structure and mapping of conformational epitopes of envelope glycoprotein Japanese Encephalitis virus[J].Virology,1999,261:31-42.
  • 2J萨姆布鲁克 EF弗里奇 T曼尼阿蒂斯著 金冬雁 黎孟枫译.分子克隆实验指南[M].北京：科学技术出版社,1999.467.
  • 3Wu S C,Lin C W.Neutralizing peptide ligands selected from phage-displayed libraries mimic the conformational epitope on domain Ⅲ of the Japanese encephalitis virus envelope protein[J].Virus Res,2001,76(1):59-69.
  • 4Kolaskar A S,Kulkarni-Kale U.Prediction of three-dimensional structure and mapping of conformational epitopes of envelope glycoprotein of Japanese encephalitis virus[J].Virology,1999,261(1):31-42.
  • 5范行良,俞永新,李德富,姚智慧.流行性乙型脑炎减毒活疫苗SA_(14)-14-2E基因的稳定性[J].病毒学报,2002,18(1):39-47. 被引量：12
  • 6Aihara S,Rao C,Yu YX,et al.Identification of mutations that occurredon the genome of Japanese encephalitis virus during the attenuation process[J].Virus Genes,1991,5:95-109.
  • 7曾明,俞永新,董关木,贾丽丽,姚亚夫,李德富.乙型脑炎病毒减毒活疫苗生产株SA_(14)-14-2基因组全序列的测定[J].中华微生物学和免疫学杂志,2001,21(5):535-539. 被引量：36
  • 8Monath T P,Soike K I,Levenbook,et al.Recombinant,chimeric live,attenua ted vaccine incorporating the envelope genes of Japanese encephalitis(SA14-14-2) virus and the cap sid and nonstructural genes of yellow fever(17D) virus is safe,immunogenic and protective in nonhuman primate[J].Vaccine 1999,17:1869-1882.

二级参考文献11

  • 1贾丽丽,郑铮,郭玉鹏,俞永新.流行性乙型脑炎减毒活疫苗生产毒株(SA_(14)-14-2)的稳定性研究[J].中国生物制品学杂志,1992,5(4):174-176. 被引量：12
  • 2俞永新 武佩芬 等.一株免疫性进一步提高的乙脑活疫苗减毒株的选育.I.SA14-14-2弱毒株某些生物学特性[J].中华微生物和免疫学杂志,1981,1:77-84.
  • 3俞永新 敖坚 等.流行性乙型脑炎疫苗的变异．V．活疫苗弱毒株的生物学特性[J].微生物学报,1973,13(1):16-24.
  • 4中国医学科学院病毒学研究所脑炎组.乙脑减毒活疫苗的研究：I．SA14－2－8株的来源及其生物性状[J].微生物学报,1974,14(2):176-176.
  • 5中国医学科学院病毒学研究所脑炎组.乙脑减毒活疫苗的研究：Ⅱ．2－8株免疫马的安全性及免疫效果的观察[J].微生物学报,1974,14(2):185-185.
  • 6敖坚 俞永新 等.SA14－14－2减毒株活疫苗对人体的安全性及免疫原性[J].中华微生物学和免疫学杂志,1983,3(4):245-248.
  • 7Ni H L，J Gen Virol，1995年，76卷，409页
  • 8Nitayaphan S，Virology，1990年，177卷，541页
  • 9Aihara S，Virus Genes，1990年，5卷，95页
  • 10周本立,贾丽丽,许先兰3,王怀明,薛振亚,张振军,张岷,张然,张立平,孙应强,姚亚夫,陈品权,苏斌3,许明德3,岳广智,马志欣,3赵键,高顶元,指导:俞永新.流行性乙型脑炎减毒活疫苗大面积接种后安全性和流行病学效果的5年观察[J].中华流行病学杂志,1999,20(1):38-41. 被引量：50

共引文献53

同被引文献26

  • 1J.Sambrook.分子克隆实验指南,金冬雁,译.2版.北京:科学出版社,1992:880-887.
  • 2张雪寒,何孔旺,俞正玉,郭容利,倪艳秀.乙型脑炎病毒E基因在杆状病毒中的表达及其初步应用[J].中国人兽共患病学报,2007,23(9):873-877. 被引量：4
  • 3Chen H W, Pan C H, Liau M Y, et al. Screening of protective antigens of Japanese encephalitis virus by DNA immunization: A comparative study with conventional viral vaccines[J]. J Virol, 1999,73(12) :10127-10145.
  • 4Chen W R, Tesh R B, Rico-Hesse R. Genetic variation of Japa nese encephalitis virus in nature[J].J Gen Virol, 1990,71 (12) 2915-2922.
  • 5Kolaskar A S, Kulkarni-Kale U. Prediction of three-dimensional structure and mapping of conformational epitopes of envelope glycoprotein of Japanese encephalitis virus[J].Virology, 1999, 261(1) :31-42.
  • 6Mandl C W, Guirakhoo F, Holzmann H, et al. Antigenic struc ture of the flavivirus envelope protein E at the molecular level using tick-borne encephalitis virus as a model[J]. J Virot, 1989 63(2) :564-571.
  • 7McMinn P C. The molecular basis of virulence of the encephali togenic flaviviruses[J]. J Gen Virol,1997,78(11):2711-2722.
  • 8Takasaki T. Japanese encephalitis virus and other flaviviruses [J]. Nippon Rinsho,2010,68(6):363-366.
  • 9Tang W F, Ogawa M, Eshita Y, et al. Molecular evolution of Japanese encephalitis virus isolates from swine in Oita, Japan during 1980- 2009[J].Infect Genet Evol,2010,10(2) :329-336.
  • 10Yang Y, Ye J, Yang X H, et al. Japanese encephalitis virus in fection induces changes of mRNA profile of mouse spleen and brain[J]. VirolJ, 2011,8:80.

引证文献2

二级引证文献1

西北民族大学学报（自然科学版）
2011年 第1期

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