Skp2-siRNA对Eca-109食管癌细胞系p^(27kip1)蛋白表达的影响

目的观察通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)使Skp2基因沉默转染后对食管癌Eca-109细胞株中p27kip1表达的影响。方法以Eca-109食管癌细胞系作为实验对象,设计合成针对Skp2的siRNA并进行转染。实验分为转染组、空白对照组、转染对照组、阴性对照组。采用免疫组化方法(SP法)检测各组Eca-109食管癌细胞系p27kip1蛋白表达的情况,采用Imageproplus(IPP)测定累积光密度值(IOD)。每张切片选5个视野,求IOD均值。采用方差分析进行组间均数比较,以p<0.05表示差异有统计学意义。结果①RNAi-Mate转染Eca-109细胞6 h后用荧光显微镜检测,计数转染Eca-109细胞的效率>80%,本实验选此比例作为实验浓度。②经过转染后24 h的细胞开始变圆,生长比同时间正常培养的对照组细胞缓慢,48 h后细胞出现凋亡,有部分细胞脱落,72 h后细胞脱落变多。③免疫组化检测结果显示:转染24 h后p27kip1蛋白表达开始上升IOD值为7.295±0.277、48 h后上升最明显IOD值为9.075±0.880、72 h后p27kip1蛋白表达开始下降IOD值为3.506±0.160,与空白对照组相比较,差异有显著统计学意义(P<0.01,psiRNA=0.000),转染组24 h、48 h、72 h之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论将人Skp2-siRNA转染入Eca-109食管癌细胞系后,能有效通过下调Skp2的表达,而上调p27kip1蛋白的表达。说明Skp2在Eca-109食管癌细胞增殖调控中起到重要作用,RNAi技术有可能作为抑制肿瘤细胞生长的一种手段。