跨膜钙梯差对葡萄糖转运体构象与活性的影响

用正向封闭的血影膜囊泡(ROVs)或重组脂蛋白体分别研究了跨膜Ca^(2+)梯差对人红细胞葡萄糖转运体(Glut 1)活性的影响。结果表明在跨膜Ca^(2+)梯度100倍时(Ca_o:Ca_i=1 000μmol/L:10μmol/L)Glut 1的转运活性为最高。然后,随着跨膜Ca^(2+)浓度梯度的降低,Glut 1的活性也逐渐下降。对跨膜Ca^(2+)梯差影响Glut 1构象进行了以下研究:(1)用ATP或D-葡萄糖对Glutl荧光淬灭滴定;(2)Glut 1内源荧光强度测定与荧光淬灭;(3)用IAEDANS和NPM分别对Glut 1胞浆微区巯基(cys-207)与膜微区的巯基进行标记;(4)用DPH荧光探针测定膜的流动性等。结果表明一个合适的跨膜Ca^(2+)浓度梯度的存在对于调节Glut 1的功能和构象具有重要意义。