禽流感病毒M2胞外区(M2e)多拷贝片段的原核表达及其免疫原性分析

目的:构建禽流感病毒M2基因胞外区(M2e)多拷贝片段的原核表达载体,并对表达、纯化的重组蛋白进行免疫原性的分析。方法:以含有全长M2基因的质粒19T-M2为模板PCR扩增获得M2e,通过PCR及同尾酶连接的技术构建一系列的M2e多拷贝中间载体,得到顺次连接的9个拷贝M2e(9c),将其克隆到原核表达载体pET-32a中,经酶切和DNA测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western blot分析蛋白表达情况。用纯化后的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取动物血清作ELISA检测M2e特异性抗体IgG并取脾脏细胞作ELISpot检测细胞分泌IFN-γ的情况。结果:结果显示,重组菌能够表达出一条相对分子质量(Mr)约为45 000的可溶性融合蛋白(M2e-9c),该蛋白表达量约占菌体表达量的37.2%。纯化蛋白免疫小鼠后,M2e特异性IgG滴度可达到1×104,M2e肽段能够刺激免疫组小鼠脾细胞分泌IFN-γ且具有一定的浓度依赖性。结论:M2e多拷贝重组蛋白可以诱导小鼠产生抗M2e特异性的抗体反应和细胞免疫反应,说明该蛋白具有良好的免疫原性,为流感病毒广谱疫苗的进一步研发打下了基础。