实时荧光定量PCR检测精子线粒体DNA的提取效率

目的:测定宝生物工程有限(大连)公司和上海杰美基因医药科技有限公司两种试剂盒精子线粒体DNA提取的效率,以及核基因组DNA的残留。方法:CASA法计数精子数量,试剂盒提取线粒体DNA,TaqMan法荧光实时定量PCR,利用标准曲线测定线粒体基因Cox-I片段、核基因β-actin片段的拷贝数,计算出精子线粒体DNA的提取效率和核基因组DNA的残留。结果:两种试剂盒精子线粒体DNA提取效率分别是:0.44%±0.03%和6.19%±0.17%。核基因组DNA的残留率分别为4.71%±0.76%和38.1%±1.97%。结论:后者线粒体DNA提取效率高一个数量级,但核基因组DNA的残留率也高一个数量级。