块根紫金牛ISSR-PCR反应体系的建立与优化

Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Ardisia pseudocrispa

采用正交和单因素试验设计方法,研究Mg2+、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、退火温度及循环次数对ISSR-PCR扩增效果的影响,建立块根紫金牛ISSR-PCR反应体系和扩增程序,即25 ul的体系中含Mg2+2.0 mmol/L,dNTP 0.15mmol/L,引物1.0μmol/L,TaqDNA聚合酶1.0 U,模板DNA 50ng,10×Buffer 2.5μl。适宜的扩增程序是94℃预变性5 min,94℃变性30 s,56.6℃退火45 s,70℃延伸2.0 min;45个循环;72℃延伸7 min,4℃保存。采用正交和单因素试验可快速建立ISSR-PCR反应体系。该体系稳定、可靠,可用于块根紫金牛遗传多样性分析。