（-）-表没食子儿茶素没食子酸酯对类风湿关节炎的免疫调节机制研究

Immunological regulation mechanism of （-）-epigallocatechin-3-gallate on rheumatoid arthritis

目的①研究（-）-表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对类风湿关节炎（RA）患者外周血和滑液中T细胞增殖的影响及对RA相关细胞因子的免疫调节作用。②观察EGCG对RA滑膜成纤维细胞（FLS）增殖的影响。方法①取RA患者外周血（30份）、滑液（23份）分离单个核细胞，并分设空白对照组，阴性对照组，甲氨蝶呤阳性对照组，EGCG低、中、高剂量组，通过同位素（^3H）掺入法，在体外研究EGCG对RA患者外周血及滑液中T细胞增殖的影响；酶联免疫吸附试验（EHSA）法检测EGCG对RA外周血及滑液中肿瘤坏死因子（TNF）-α、干扰素-γ、白细胞介素（IL）－1、IL－6和IL－17A的影响。②取RA患者滑膜组织（8例）进行原代培养，并分设空白对照组，甲氨蝶呤组（阳性对照），EGCG低、中、高剂量组，通过四甲基偶氮唑蓝（NYr）比色法，在体外研究EGCG对RA患者FLS增殖的影响。统计学处理采用方差分析和SNK—q检验。结果①RA患者外周血及滑液中EGCG高剂量组每分钟脉冲数（cpm）值[分别是（15136±2910），（11587±3135）]，较阴性对照组（42856±2127）（35748±4512）下降，差异均有统计学意义（P均〈0．01）；外周血中EGCG高剂量组TNF—α、干扰素-γ、IL-1、IL-6和IL-17A吸光度值分别是[（321±13）、（298±20）、（132±12）、（197±7）、（59±8）pg／ml]，均较阴性对照组[（458±28）、（505±26）、（346±28）、（405±25）、（109±13）μml]下降，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；滑液中EGCG高剂量组TNF-α、干扰素-γ、IL-1、IL-6和IL-17A吸光度值分别是[（41．4±2．9）、（182±16）、（56．3±11．0）、（34．2±1．9）、（44±8）μml]，均较阴性对照组[（388．3±19．3）、（469±20）、（104．2±17．8）、（114．5±4．8）、（104±11）petal]下降，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。②EGCG高剂量组FLS吸光度值（O．080t0．017），较空白对照组（0．274±0．041）下降，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论EGCG可体外抑制RA患者外周血和滑液中T细胞增殖，抑制TNF-α、干扰素-γ、IL-1、IL-6和IL—17A分泌；可体外抑制RAFLS增殖。

Objective To study the （-）-epigallocatechin-3-gallate （EGCG） function on the proliferation of T cells derived from the peripheral blood and synovial fluid of rheumatoid arthritis （RA） and RA-related cytokine levels and the role of EGCG on RA synovial fibroblasts （FI5） proliferation was investigated. Methods （1） Mononuclear Cells from RA peripheral blood （30 cases） and synovial fluid （23 cases） were isolated. Blank group, negative control group, positive control methotrexate （MTX） group and therapeutic group with three different concentrations of EGCG were set up. Incorporated isotope 3H was used to test T cell proliferation from RA-PBMC and SFMC. ELISA assay was used to test cytokine （TNF-α, IFN-γ, IL-1, IL-6 and IL-17A） levels. （2） MTT assay was used to test FLS proliferation from RA synovial tissue （8 cases）.Results （1） The CPM value of the high-dose group of EGCG in the peripheral blood and synovial fluid of RA patients was [ （15 136±2910）, （11 587±3135） ], which was declined significantly than the control group （42 856±2127） （P〈0.01）. The levels of TNF-＋, IFN-γ, IL-1, IL-6 and IL-17A in the high-dose group of EGCG in the peripheral blood were [（321±13）, （298±20）, （132±12）, （197±7）, （59±8） pg/ml], which were decreased significantly than those of the control group [ （458 ±28 ） , （505 ±26 ）, （346±28）, （405 ±25 ）, （109±13） pg/ml] （P〈0.05 or P〈0.01）. The levels of TNF-α, IFN-γ IL-1, IL-6 and IL-17A in the high- dose group of EGCG in the synovial fluid were [（41.4±2.9）, （182±16）, （56.3±11.0）, （34.2±1.9）, （44±8） pg/ml], which was deere-ased significantly than the control group [ （388.3±19.3）, （469±20）, （104.2±17.8）, （114.5±4.8）, （104±11） pg/ml] （P〈0.05 or P〈0.01）. （1） The level （A） of the high-dose group of EGCG in the FLS was （0.08±0.02）, which was declined significantly than the blank group （0.27±0.04） （P〈0.05）. Conclusion （1） In vitro EGCG can inhibit T celt proliferation from peripheral blood and synovial fluid of RA patients and the TNF-α, IFN-γ, IL-1, IL-6 and IL-17A secretion are decreased. （2）In vitro EGCG can inhibit the proliferation of RA FLS.