利用普通冰箱冻存肿瘤细胞的技术研究

利用普通冰箱-18℃冷冻保存组织、细胞,迄今少见报道.本实验以人肝癌细胞株Bel7402为对象,探讨-18℃冷冻保存方法.1材料与方法1.1 细胞来源及培养方法人肝癌细胞株Bel7402引自中山医科大学实验动物中心,置于含100mL/L新生牛血清的RPMI1640培养液中,在37℃,50mL/LCO2,饱湿条件下传代培养,细胞贴壁生长.1.2 试剂DMSO（AR）由北京化工厂生产;新生牛血清由杭州四季青生物工程材料研究所生产;RPMI 1640由Life Technologies Ins生产;胰蛋白酶（AR）由新疆化学研究所生产.1.3 冻存方法处于对数生长期的细胞经D-Hank’s液洗2次,后用0.25%胰蛋白酶消化,再用含100mL/L新生牛血清的1640液洗涤1次.后分别用含5%、10%、15%、20%DMSO的完全培养基（含100mL/L新生牛血清1640）重新制成细胞悬液.细胞浓度保持在1×106/mL左右.将细胞悬液置于2mL的硬塑料冻存管中,加盖密封,做好标记.直接迅速地放入-18℃冰箱中冻存.每份样品分装4支冻存管,每管装1mL悬液.于1周,1个月,2个月,3个月后分别进行融冻.