猪乙型脑炎病毒间接酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒的研制及其应用

为研制一种快速猪乙型脑炎病毒抗体检测试剂盒,本研究参照已发表的JEV(乙型脑炎病毒)基因组序列,RT-PCR扩增了长约1 000 bp的E基因片段,连接pET30a表达载体后获得了以包涵体形式表达的重组E蛋白,以该蛋白作为诊断抗原,研制了检测乙型脑炎病毒抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附试验)诊断试剂盒。该试剂盒与其它7种常见猪病病毒(圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、蓝耳病病毒、细小病毒、流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒)的阳性血清不发生交叉反应;批内重复性试验的变异系数小于5%,批间重复性试验的变异系数小于10%;与HI(血凝抑制试验)相比,符合率、敏感性和特异性分别为83.1%、84.3%和80.0%。本研究制备的重组蛋白具有良好的反应活性,以其作为包被抗原研制的JEV E-ELISA诊断试剂盒具有良好的重复性、敏感性和特异性,为JEV的快速诊断、免疫猪群抗体监测和JEV流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断试剂盒。