脐带血血清在脐静脉内皮细胞培养中的应用

目的通过观察以人脐带血血清为主体的培养体系对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外培养扩增的影响,探讨人脐带血血清替代动物血清用于培养HUVEC的可行性。方法将取来的脐带,分成25 cm的两段(A、B段),均采用胰酶消化法分离HUVEC,分别加入DMEM完全培养液A(含20%的脐带血血清)和B(含20%的胎牛血清、20 ng/mL的血管内皮生长因子),并通过传代进行纯化和扩增培养,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察并绘制细胞生长曲线,用免疫组织化学方法对所得细胞进行鉴定,用流式细胞术检测细胞周期。结果成功建立了以人脐带血血清为主体的培养体系的HUVEC培养扩增的方法,A、B两段脐带HUVEC吸光度无明显差异(P>0.05),免疫组化可见两段HUVEC胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原均呈阳性反应,流式细胞术检测结果显示,A段HUVEC S期的细胞约占35.5%,S+G2+M期的细胞约占48.2%活跃于增殖期,而处于G0/G1期的细胞约占58.3%左右,符合其生长特性。结论应用灭活脐带血血清培养体系可成功扩增HUVEC,培养的细胞具有HUVEC的基本特性,脐带血血清可在取脐带的同时获得,方法简便,无需购买,为体外研究血管内皮细胞提供了价廉、易行的实验手段。