猪细小病毒VP2蛋白的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立

参照已发表的PPV基因组序列,设计合成1对特异性引物,PCR扩增了长约810 bp的VP2基因片段。将目的片段定向克隆到pET30a表达载体中,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导得到了以包涵体形式表达的重组蛋白。将重组蛋白变性、纯化和复性后,免疫印迹检测证明纯化的重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。以该蛋白作为诊断抗原,建立了检测猪细小病毒抗体的VP2-ELISA诊断方法。该方法检测其他7种常见猪病病毒(PCV-2、PRV、PRRSV、JEV、PEDV、TGEV、CSFV)的阳性血清均为阴性;批内重复性试验的变异系数小于5%,批间重复性试验的变异系数小于10%;与血凝抑制(HI)相比较,符合率、敏感性和特异性分别为90.3%、86.6%和94.5%。本研究制备的重组VP2蛋白具有良好的免疫原性,以其作为包被抗原建立的PPV VP2-ELISA诊断方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为猪细小病毒病的快速诊断、免疫猪群抗体监测和流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。