人骨关节炎退变软骨组织的细胞体外培养及形态特征观察

目的探索人骨关节炎(OA)退变软骨细胞的原代培养方法并观察其形态学特征及传代特点。方法采用组织块法培养,待原代细胞长满皿底,用2.5 g/L的胰蛋白酶溶液对细胞进行消化,传代爬片10 d,用4%的多聚甲醛固定15 min,进行HE、甲苯胺蓝、Ⅰ型胶原免疫荧光、Ⅱ型胶原免疫荧光、Ⅹ型胶原免疫荧光染色观察。结果原代培养2周左右可见少量细胞散在分布于组织块周围,3周出现细胞自融,4～5周基本长满皿底,观察发现软骨细胞大多呈梭形或短梭形,少部分呈多角形,细胞核为圆形或椭圆形,偏于细胞的一侧而贴近细胞膜;Ⅱ型胶原和Ⅰ型胶原免疫荧光均有一定的表达,Ⅹ型胶原免疫荧光表达较高。结论通过组织块细胞培养法能获得一定数量的退变软骨细胞,可成功地进行传代及形态特征观察,证明退变软骨组织细胞主要为成纤维样软骨细胞及肥大软骨样细胞。