适用于野生型枯草芽孢杆菌转化有机溶剂方法的建立和优化

用经典的spizizen方法将穿梭质粒pLJ导入Bacillus subtilis 168、Bacillus subtilisWB600、Bacillus subtilis WB800中,均能达到70多个转化子/μg DNA的较高转化效率,但用此方法将该质粒导入由本实验室筛选并保存的野生型Bacillus subtilis NX-2中,不能获得转化子。本研究对spizizen转化方法进行了改进,通过添加不同浓度的吐温-80,DMSO、丙酮、甲苯、乙醇等有机溶剂,均能获得转化子。同时,本研究对转化条件进行了优化,分别选取吐温-80、DMSO、甲苯等3种效果较好的添加剂设计正交实验。试验结果表明,在添加4%吐温-80、3%DMSO、1%甲苯的条件下得到了34个转化子/μg DNA的较高转化效率。还研究了质粒与感受态共培养时间和感受态稀释倍数对转化的影响,当质粒与感受态共培养时间为3 h,感受态稀释5倍时,转化效率较高。