轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者β-珠蛋白基因（ AC）n（AT）x Ty多态性分析

Polymorphisms of （AC）n （AT）xTy in the upstream of β-globin gene in patients with mild β-thalassemia

目的 探讨轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者β-珠蛋白基因（AC）n（AT）xTy多态性与其基因突变的相关性.方法 选取2009年2月至2010年7月深圳市宝安区人民医院89例已知基因突变类型的轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者和110名中国汉族人群健康对照者.抽取所有个体外周静脉血,抽提基因组DNA,通过聚合酶链反应扩增β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区序列,经DNA测序确定（AC）n（AT）xTy序列的多态性,分析（AC）n（AT）xTy多态性与其基因突变的关系.轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者和健康对照者间（AC）n（AT）xTy多态性单倍型频率的比较,以及同一单倍型患者的不同突变类型发生率间的比较采用x2检验.结果 在轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者的β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区存在9种（AC）n（AT）xTy多态性序列,分别是（AC）2（AT）7T7、（AC）2 （AT）8T5、（AC）3 （AT）7T5、（AC）2 （AT）9T5、（AC）2 （AT）8T9、（AC）3 （AT）8T5、（AC）2（AT）10T3、（AC）2（AT）7T5和（AC）2（AT） 11T3,其中（AC）2 （AT）7T7和（AC）2（AT）8T5是常见单倍型.轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者的（AC）2（AT）7T7、（AC）3 （AT）7T5和（AC）2（AT）8T9单倍型频率分别为38.8％（ 69/178）、11.8％（ 21/178）、9.0％（ 16/178）,显著高于健康对照组的24.1％（53/220）、5.4％ （12/220）、3.2％ （7/220）,差异有统计学意义（x2=9.966、4.371、6.093,P＜0.05）；（AC）2 （AT）9T5单倍型频率为10.1％（18/178）,显著低于健康对照组的33.2％ （73/220）,差异有统计学意义（x2=29.691,P＜0.01）；而（AC）2 （AT）8T5单倍型频率在患者组和健康对照组分别为25.3％ （45/178）和29.1％ （64/220）,差异无统计学意义（x2 =0.718,P＞0.05）.在（AC）2 （AT）7T7单倍型患者中,codon41/42（-TTCT）和IVS-II-654（C→T）的突变率分别为59％（ 10/17）和29％（5/17）,差异无统计学意义（x2=2.982,P＞0.05）；在（AC）2（ AT）8T5单倍型患者中,codon41/42（-TTCT）和IVS-Ⅱ-654（C→T）的突变率分别为29％（4/14）和57％ （8/14）,差异无统计学意义（x2=2.333,P＞0.05）.结论 β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区的（AC）2 （AT） 7T7、（AC）3 （AT）7T5和（AC）2（AT）8T9单倍型与轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血存在连锁不平衡.在轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者中,携带（ AC）2（ AT）7T7单倍型和（AC）2（AT） 8T5单倍型患者的主要致病突变分别为codon41/42 （-TTCT）和IVS-II-654（C→T）.

Objective To explore linkage relationship between polymorphisms of （AC）n （AT）xTy and mutations in the β-globin gene in patients with mild β-thalassemia.Methods The subjects were 89 mild β-thalassemia patients with known mutations and 110 healthy subjects from People＇s Hospital of Baoan District of Shenzhen from February 2009 to July 2010.Genomic DNA was extracted from peripheral leukocytes.Sequence of the BP1 binding site upstream of the β-globin gene was amplified by polymerase chain reaction,polymorphisms of （AC）n （AT）xTy were determined by DNA sequencing.Allelic frequencies of （AC）n （AT）xTy between mild β-thalassemia patients and healthy subjects were compared using x2 test.Mutation rates between two groups were also compared using x2 test for subjects carrying same haplotype. Linkage relationship was conducted according to allelic frequencies and mutations. Results Analysis of the （AC）n（AT） xTy polymorphisms of the BP1 binding site upstream of the β-globin gene showed 9 different genotypes： （AC）2（ AT）7T7,（ AC）2（ AT）8T5,（ AC）3（ AT）7T5,（ AC）2（ AT）9T5,（ AC）2（AT）8T9,（AC）3（AT）8T5,（AC）2（AT）10T3,（AC）2（AT）7T5 and （AC）2（AT）11T3.The （AC）2（AT）7T7 and （AC）2 （AT）8T5 genotypes were common for patients with mild β-thalassemia.Allele frequencies of （AC）2（AT）7T7,（AC）3 （ AT）7T5 and （ AC）2（ AT）8T9 were 38.8% （69/178）,11.8%（21/178）,9.0% （ 16/178 ） for mild β-thalassemia patients,and 24.1% （ 53/220）,5.4% （ 12/220）,3.2% （7/220） for healthy subjects, respectively, there were significant differences between mild β-thalassemia patients and healthy subjects （x2 =9.966,4.371,6.093,P 〈 0.05 ）.Allele frequency of （AC）2（AT）9T5 was 10.1% （18/178） and 33.2% （73/220） for mild β-thalassemia patients and healthy subjects,frequency of （AC）2 （AT）9T5 was significandy lower in mild β-thalassemia patients than in healthy subjects （x2 =29.691,P 〈0.01 ）.Allele frequency of （AC）2（AT）8T5 was 25.3% （45/178） and 29.1%（64/220） for mild β-thalassemia patients and healthy subjects,there wasn＇t significant difference between patients and healthy subjects （x2 =0.718,P 〉0.05）.The mutation rates of codon41/42（-TTCT） and IVSⅡ-654（C→T） were 59% （10/17） and 29% （5/17） for mild β-thalassemia patients carrying （AC）2（AT）7T7 allele,and 29% （4/14） and 57% （8/14） for patients carrying （ AC）2 （AT）8T5 allele.There were not significant differences between codon41/42（-TTCT） mutation rate and IVS-Ⅱ-654（C→T） mutation rate （x2 =2.982,2.333,P 〉 0.05 ） for mild β-thalassemia patients carrying （ AC）2 （ AT）7T7 and （ AC）2（AT）8T5 allele.Conclusions Allele of （AC）2（AT）7T7,（AC）3（AT）7T5 and （AC）2（AT）8T9 are in linkage disequilibrium with β-thalassemia.Most mild β-thalassemia patients carrying （AC）2 （AT）7T7 allele are caused by codon41/42 （-TTCT） mutation in the β-globin gene,and IVS-Ⅱ-654 （C→T） is a major mutation for patients carrying （AC）2（AT）8T5 allele.