圆弧青霉碱性脂肪酶发酵和纯化的研究

圆弧青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｙｃｌｏｐｉｕｍ）变异株 ＰＧ３７产酶最适条件：碳源用豆油；氮源用豆饼粉；装 液量５０ｍｌ／５００ｍｌ三角瓶，摇瓶转速 ２５０ｒ／ｍｉｎ，培养温度及时间分别为 ２８℃和 ９６ｈｒ，起始 pＨ７．５；发酵至第３６、５４和７２ｈｒ各流加０．４％豆油，发酵结束脂肪酶活性约１５００Ｕ／ｍl。经过 滤、硫酸铵盐析以及 Ｐｈｅｎｙl－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－４Ｂ、ＤＥＡＥ Ｓｅｐhａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｏｌｗ和 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５ 柱层析，获得比活性５２００ Ｕ／ｍｇ蛋白、纯化 １６．５倍的纯脂肪酸酶粉，纯化得率３３．２％，在聚 丙烯酰胺凝胶电泳和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ—ＰＡＧＥ）图谱上呈现单一蛋白条带。 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－ １５０凝胶过滤分别测得酶的分子量为 ２７．５ｋＤａ和 ２９ｋＤａ；酶 等电点为５．４；酶动力学常数Ｋｍ和Ｖｍａｘ分别为４．５４％（Ｖ／Ｖ）和５．５６μｍｏｌ／ｍｉｎ．μｇ；Ｎ末端１０ 个氨基酸的序列测定结果为ＡＴＡＤＡＡＡＦＰＤ，与已知碱性脂肪酶的Ｎ末端序列没有同源性。