摘要
目的:构建人B淋巴细胞刺激因子(hBAFF)的真核表达质粒,表达具有生物学功能的Fc-hBAFF融合蛋白。方法:PCR扩增hbaff胞外区编码基因,加入HA信号肽与hIgG1 Fc后,连入pTT3真核表达载体,采用磷酸钙法转染293T细胞。培养上清经蛋白G纯化后,SDS-PAGE与Westernblot鉴定目的蛋白的表达。流式细胞术检测Fc-hBAFF对人B细胞的增殖情况。结果:成功构建pTT3-HA-hIgG1 Fc-hBAFF融合表达质粒,体外大量表达纯化的Fc-hBAFF蛋白经SDS-PAGE与Western blot鉴定正确,并发现Fc-hBAFF蛋白对人外周血B细胞有明显促增殖作用。同时通过尾静脉高压注射的方式证实该质粒能在体内持续表达7 d。结论:体外表达并获得了具有生物学功能的Fc-hBAFF融合蛋白。
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期433-435,共3页
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology
基金
国家自然科学基金资助项目(30872829)