兔羟类固醇磺基转移酶AST-RB_2的分子克隆、表达和酶学特性

胞质磺基转移酶至少有三个基因家族组成 ,最近纯化到的一个兔羟类固醇磺基转移酶 AST- RB2 ( ST2 A8) ,对羟类固醇和胺类表现出很高的催化活性。为了鉴别此酶 ,兔的 c DNA文库用抗 AST- RB2 抗体筛选阳性克隆。根据纯化的 AST- RB2 氨基酸序列 ,可判定筛选的 c DNA克隆为编码 AST- RB2 的基因。克隆的 c DNA与其它哺乳动物的羟类固醇磺基转移酶 ( ST2 )在氨基酸水平有较高的同源性 ( 5 8%～ 6 8% ) ,但与芳香磺基转移酶 ( ST1 )的同源性较低 ( <37% )。在大肠杆菌中表达的蛋白质可催化典型的 ST2 底物硫酸化 ,根据 ST2 A8的基本结构及底物特异性可判定其属于 ST2 家族。在大肠杆菌中表达的 ST2 A8的细胞定位 (胞质 /不溶性片段 )也与鼠 ST2 A1和 ST2 A2有明显的不同。ST2 A8对石胆酸没有催化活性 ,但对脱氧表雄酮和睾酮却表现出极高的催化活性 ,由此表明 ST2 A各型 ( ST2 A1 ,ST2 A2、ST2 A3、ST2 A8)的内源性底物特异性有明显差异。