应用斑点酶联免疫吸附试验诊断山羊蠕形螨病的研究

应用Ｄｏｔ－Ｅｌｉｓａ方法进行山羊蠕形螨的免疫学诊断，从刚屠宰羊的新鲜皮张上无菌采取蠕形螨病灶内的乳白色干酪样内容物（内含大量的虫卵和各期虫体及其分泌物）。将病料加适量ｐＨ７．２的０．０１ｍｏｌＰＢＳ液及防腐剂，捣碎机捣碎，３０００ｒ／ｍｉ。离心３５ｍｉｎ（分钟），取沉淀物用组织捣碎器反复捣碎，直至显微镜检查无完整虫体及虫卵为止。反复冻溶１０次，超声波粉碎２次，每次２０ｍｉｎ，低温高速离心１ｈ（小时），取上清液经紫外分光光度计测定抗原蛋白含量。制备血清，应用（ＮＨ４）_２ＳＯ_４沉淀法提取牛血清ＩｇＧ，免疫兔，经ＩＨＡ效价测定达到一定效价时分离血清备用，斑点酶联免疫吸附试验结果：其蛋白含量为１．２１ｍｇ／ｍｌ。抗原、抗体的最佳工作浓度；抗原在０．１μｇ／μＩ、抗体在２００倍稀释时．阳性血清组在硝酸纤维膜上出现清晰的棕褐色斑点，阴性血清不出现斑点。Ｄｏｔ－Ｅｌｉｓａ的敏感度比ＩＨＡ高１２０～１８０个稀释度。用所制备的复合可溶性抗原与肝片吸虫阳性血清及蠕形螨阳性血清分别作Ｄｏｔ－Ｅｌｉｓａ试验．结果蠕形螨阳性血清组呈现棕褐色斑点，肝片吸虫阳性血清组不出现棕褐色斑点。