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构建和鉴定神经生长因子-β腺相关病毒穿梭质粒 被引量：2

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摘要 目的构建能够表达神经生长因子-β重组腺相关病毒穿梭质粒,为进一步包装腺相关病毒奠定基础。方法利用高保真酶分别扩增pAAV-MCS的结构元件和pGenesil-1.1的功能元件,连入T-easy载体,限制性核酸内切酶酶切并回收目的片段,T4酶连接,得到含U6和CMV双启动子的重组腺相关病毒穿梭质粒pAAV-U6/CMV-EGFP;培养人MIApaca-2细胞,提取总RNA,进行RT-PCR得到人ngf-β基因,插入T-easy载体,得到T-easy-ngf-β;将ngf-β插入pAAV-U6/CMV-EGFP,构建ngf-β重组腺相关病毒穿梭质粒。结果酶切pAAV-U6/CMV-EGFP可见4250bp、800bp条带,质粒转染293细胞后可见绿色荧光蛋白表达;质粒T-easy-ngf-β酶切可见3kb、736bp条带,测序显示基因序列正确;酶切pAAV-U6/CMV-ngf-β可见4300bp、736bp条带;质粒pAAV-U6/CMV-ngf-β测序显示载体中的基因序列正确。结论成功构建ngf-β重组腺相关病毒穿梭质粒,包装表达神经生长因子的腺相关病毒,为进一步深入研究脊髓损伤的修复提供了实验基础。
作者 高大龙 解俊杰 李若飞 党晓谦 王坤正 杨雷刚 涂忠民
机构地区 咸阳市中心医院骨一科 西安交通大学医学院第二附属医院骨一科
出处 《中华临床医师杂志（电子版）》 CAS 2012年第7期130-131,共2页 Chinese Journal of Clinicians(Electronic Edition)
基金 国家自然科学基金项目(30772189)
关键词 脊髓损伤 神经生长因子-β 腺相关病毒 穿梭质粒
分类号 R651.2 [医药卫生—外科学]
  • 相关文献

参考文献9

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共引文献6

同被引文献13

引证文献2

二级引证文献6

中华临床医师杂志（电子版）
2012年 第7期

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