摘要
目的构建凋亡素VP3蛋白的原核表达质粒,并进行诱导表达和蛋白纯化。方法采用PCR法自PGEX-6P-1/TAT-VP3质粒中扩增VP3基因,运用靶向克隆酶将VP3基因插入线性pET15b,构建重组表达质粒pET-15b-VP3;经测序证实构建成功后转化E.coli Rosetta,表达凋亡素VP3蛋白;经Ni-NTA树脂亲和层析,对纯化产物进行SDS-PAGE、Western blotting分析鉴定。结果成功构建凋亡素VP3蛋白原核表达质粒,表达并纯化了分子量为13.6 kD的凋亡素VP3蛋白。结论凋亡素VP蛋白原核表达载体的构建及目的蛋白的表达纯化,为体内应用凋亡素VP3蛋白进行抗肿瘤研究奠定了基础。
出处
《山东医药》
CAS
2012年第17期42-43,共2页
Shandong Medical Journal
基金
湖北省卫生厅青年基金资助项目(QJX2008-42)
湖北医药学院创新基金项目(2010XSA02)
十堰市科技局基金项目(2010st24)