淋巴毒素β受体和核转录因子-κB经典通路P65在膀胱组织中表达的实验研究

An experimental research on effect of LTI3R and P65 in progression of bladder cancer

目的探讨淋巴毒素β受体（LTβR）和核转录因子（NF）-κB经典通路因子P65在膀胱癌（BCa）和膀胱炎组织中的表达情况及与BCa临床病理指征的关系。方法采用实时荧光定量PcR检测108份新鲜膀胱组织标本（按照病理检查结果分为BCa组75份、膀胱炎组10份和正常膀胱黏膜组23份）中的LT[3R和P65的mRNA相对含量；采用免疫组织化学方法检测118份病理石蜡切片（BCa切片组73份、膀胱炎切片组30份和正常膀胱黏膜切片组15份）中的LTβR与磷酸化蛋白P65（p-P65）表达水平，并分析其表达与BCa分级分期和淋巴结转移等因素的关系。采用Kruskal-Wallis H验和χ2检验等比较不同膀胱组织间的LTBR与P65的mRNA和蛋白表达水平。结果（1）LTβR和P65mRNA相对含量在膀胱癌组中高于正常组[LTβR：29．4（14．2～46．7）×10-3、1．2（0．3～7．0）×10-3，Z=-5．508；P65：9．7（2．7～21．1）×10-3、1．0（0．8～1．8）×10-3，Z=-5．030，P均〈0．05]，两者在BCa进展[病理分级各组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级）：LTBR：18．2（2．1～31．3）×10-3、28．4（16．6—36．2）×10-3、47．9（34．3～70．5）×10-3，χ2K-W=20．378；P65：4．9（1．3—12．0）×10-3、7．4（3．0～21．9）×10-3、17．0（10．0～28．3）×10-3，χ2K-W=15．219，P均〈0．05]和淋巴结转移各组（阴性、阳性）[LTβR：27．2（9．7～40．1）×10-3、39．4（26．7—52．6）×10-3，Z=-2．552；P65：7．4（2．3～15．6）×10-3、13．4（6．7～23．3）×10-3，Z=-2．026，P均〈0．05]比较差异均有统计学意义。（2）IJTpR和p-P65蛋白阳性率在膀胱癌组中高于正常组（LTpR：69．8％、13．3％，χ2=16．600；P65：56．2％、6．7％，χ2=12．220，P均〈0．05）。LTBR和p-P65蛋白阳性率也在BCa进展（病理分级各组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级）：LTBR：56．3％、70．0％、90．4％，χ2=7．055；p-P65：40．6％、60．0％、76．2％，χ2=6．679，P均〈0．05）和淋巴结转移各组（阴性、阳性）（L113R：58．3％、92．0％，χ2=8．849；p-P65：52．1％、64．0％，χ2=5．088，P均〈0．05）比较差异均有统计学意义。（3）相关性分析显示，LTBR与P65的表达在膀胱癌组中呈正相关（mRNA：r=0．654，P〈0．05；蛋白：r=0．399，P〈0．05），LTpR与P65蛋白表达在膀胱炎组中呈正相关（r=0．521，P〈0．05）。结论LTpR和P65在膀胱癌组织中高表达，LTBR的表达可能与膀胱癌的发生发展和转移有关，且LTβR可能通过P65的激活参与经典的NF—κB通路。

Objective To investigate the relationship of lymphotoxin β receptor （LTβR） and classical nuclear faetor-κB （NF-κB） activation pathway in the pathogenesis and progress of cystitis and bladder cancer. Methods The LTβR and P65 mRNA expression were detected by Real-time quantitative PCR in 108 cases of fresh bladder tissue specimens （75 cases of bladder cancer, 10 cases of inflammation and 23 normal bladder mucosa cases grouped by the tissue classification）, and protein expression were analyzed by immunohistochemistry assay in 118 cases of paraffin-embedded biopsy specimens （73 cases of bladder cancer, 30 cases of cysitis and 15 normal bladder mucosa cases）. The correlation analysis between the expressions of LTI3R and P65 with clinical pathological data was then performed. Differences between LTI3R and P65 mRNA and protein expression level were compared in different groups of bladder tissues using Kruskal-WaUis H test and the Chi-square test. Results （1）The mRNA expressions of LTI3R and NF-KB/P65 were higher in bladder cancer than those in normal group （LTβR：29.4 （ 14. 2 -46. 7 ） ×10-3/1.2 （0. 3 - 7.0） ×10-3, Z= -5.508; P65：9.7 （2.7 -21.1）×10-3/1.0（0. 8 - 1.8） ×10-3, Z= -5.030, P〈 0.05 ）. There were significantly differences between bladder cancer with different histological grades （ LTβR ： 18.2（2.1-31.3） ×10-3/ 28.4（16.6- 36.2）×10-3/47.9（34. 3 - 70.5） ×10-3, A/K-W2 = 20. 378 ; p- P65：4.9（1.3-12.0） ×10-3/7.4（3.0-21.9） ×10-3/17.0（10.0-28.3） ×10-3 2 =15.219, Pall χ2K-W 〈0. 05） and lymph node metastasis （LTβR：27.2（9.7 -40. 1 ） ×10-3/39. 4（26. 7 -52. 6） ×10-3, Z = -2.552; P65：7.4（2.3-15.6） ×10-3/13.4（6.7-23.3）×10-3, Z= -2.026, P 〈0.05）. （2）The positive rates of LTβR and phosphorylated P65 （p-P65） protein in cancer were higher than those of normal group （ LTβR ： 69.8 % / 13.3 %, χ2 = 16. 600 ; p-P65 ： 56. 2 %/6. 7 % , X2 = 12. 220, P 〈 0. 05 ）. Upregulation of LTβR and p-P65 were associated with the histological grade （LTf3R： 56. 3%/70. 0%/90.4%, χ2 = 7.055 ; p-P65：40. 6%/60. 0%/76. 2%, X： = 6. 679, P 〈 0. 05 ） and with lymph node metastasis （ LTβR： 58.3 %/92. 0%, X2 = 8. 849 ; p-P65：52. 1% / 64. 0%, χ2= 5. 088, P 〈 0. 05 ）. （ 3 ） There was a positive correlation between LTβR and P65 expression （mRNA-r =0. 654, P 〈0. 05, protein-r =0. 399, P 〈0.05） in the bladder cancer and cystitis （r = 0. 521, P 〈 0. 05）. Conclusions The activation of LTf3R and P65 was associated with progression and metastasis of bladder cancer. The activation of classical NF-κB pathway by LTβR may be achieved by P65.