核苷(酸)类药与乙型肝炎病毒P基因变异特点及突变频率的关系

目的观察核苷(酸)类药治疗不同时间段慢性HBV感染患者血清乙型肝炎病毒聚合酶(HBV P)基因序列变异特点及突变频率。方法以乙型肝炎病毒全序列为参照,针对P区目的位点,参考引物设计原则,运用焦磷酸测序仪器配套的软件Assay Design SW在目的区域两端保守区域设计PCR引物及测序引物,采用套式PCR方法检测血清中HBV DNA,按照PyroMark ID遗传分析系统用SNP模式进行PCR产物HBVP基因相关位点的焦磷酸测序、突变频率检测,同时测定患者血清HB-VDNA、HBVM、ALT。结果 34例患者中16例发生变异,变异模式以经典突变L180M、M204V/I、A181V/T、N236T突变为主,加少量V173L突变,发生变异者耐药突变型在样本中所占比例由20%到100%;HBVP基因变异可以在HBVDNA、ALT发生突破前、中、后检出;发生HBeAg转化者P基因变异率较低。结论焦磷酸测序可以快速、准确的检测出HBVP基因变异;HBVP基因变异模式、突变频率与核苷类药物敏感性密切相关。