钙调神经磷酸酶催化结构域的活性和性质

钙调神经磷酸酶（Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ，ＣＮ）是唯一的Ｃａ２＋／钙调素（Ｃａｍｏｄｕｌｉｎ，ＣａＭ）依赖的蛋白磷酸酶，由催化亚基Ａ（ＣＮＡ， ６１ ｋｕ）和调节亚基Ｂ（ＣＮＢ， １９ ｋｕ） １：１组成．用 ＰＣＲ方法构建了仅含ＣＮＡ催化结构域的编码区ｃＤＮＡ序列．经在Ｅ．ｃｏｌｉ中诱导表达，纯化，制备了ＣＮＡ催化结构域多肽．以ＰＮＰＰ为底物，研究了其磷酸酶活力．结果表明，在有ＣａＭ和ＣＮＢ时，其活性为ＣＮＡ活性的２０倍．ＣＮＡ催化结构域多肽的最适反应温度为４０℃，其最适反应ｐＨ值为８．０．不同离子对其活性的影响为： Ｍｎ２＋仍为其强激活剂，但 ＣＮＡ催化结构域多肽不再受 Ｃａ２＋的调节．在 ６ ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２＋存在下，加Ｃａ２＋或ＥＧＴＡ，催化结构域多肽的活性相同．