聚磷激酶基因克隆及其植物表达载体构建

利用试剂盒法提取E.coli DH5α基因组DNA,根据GenBank中登录的大肠杆菌聚磷激酶(PPK)基因序列(L03719)设计引物,通过PCR扩增得PPK基因,然后将其克隆到pMD20-T Vector上并测序,测序结果与GenBank登录的序列相比对,同源性达99.9%。用限制性内切酶XbaⅠ、BamHⅠ将目的片段和植物表达载体pBI121进行双酶切,T4连接酶连接,然后转化到E.coli BL21感受态细胞,获重组植物表达载体pBI21-PPK,从而为研究转PPK基因植物的聚磷能力奠定基础。