乙型肝炎病毒DNA荧光定量PCR的建立与应用

目的建立血浆（血清）HBVDNA荧光定量PCR检测方法，探讨其临床应用价值。方法用Pucm—T载体和PCR纯化产物连接，转染DH5x茵，筛选阳性茵落，提取质粒，制作外标准品；在HBV基因组S区设计一对引物和TaqMan探针．严格优反应物的组成和扩增条件，并对该方法进行评价。结果建立的HBVDNA荧光定量PCR最低可检出800拷贝／ml；批内误差为1.8％-6．5％，批间误差2．6-9．1％；在～拷贝／ml之间与Ct值具有很好的线性（Ct=-1.39111n（x）＋41．65，y=-0．9958）；外周血HBVDNA临床定量检测发现，HBeAg阳性的130例中，HBVDNA阳性率为100％．含量为拷贝／ml．抗HBe阳性的96例中HBVDNA阳性率为55．2％（53／96）。含量为拷贝／ml；62例献血员未检出HBVDNA。乙肝临床治疗监测发现．外周血中HBVDNA含量检测可有效反映治疗效果，指导临床用药。结论荧光定量PCR检测方法是一种相对准确，灵敏度高，特异性较强和较简便的HBVDNA定量检测技术，对乙肝诊断，指导临床用药和治疗监测方面具有实用价值。