超声联合微泡体外介导NT．3基因转染神经干细胞的超声占空比探讨

目的探讨低频超声体外介导神经营养因子-3（neurotrophin-3，NT-3）基因转染神经干细胞的适宜超声占空比条件。方法体外培养神经干细胞，在24孔板中加入200斗l微泡（浓度20％）和20μlpEGFP-NT-3基因重组质粒（1斗g／斗1）混合静置30min。将500山神经干细胞悬液（3×105／m1）加入到微泡和质粒混合液中，采用超声声强1．5W／cm^2，照射时间60s，占空比分别为10％、25％和50％。用1MHz超声探头辐照上述混合液，转染后用流式细胞仪检测各组细胞基因转染率，MrIT法检测神经干细胞存活率。空白对照组为未经超声辐照的质粒与神经干细胞混合物。结果随着超声占空比升高，细胞存活率逐渐降低。占空比为50％时，细胞存活率低于40％；占空比为25％时，细胞存活率高于60％，且基因转染率明显高于占空比10％和50％组，为（18．6±0．90）％。结论通过优化超声占空比条件，证明适宜的超声占空比为25％，神经干细胞转染率最高，且细胞损伤较小。