大肠癌Cyclin D1多态性及相关细胞周期蛋白表达的研究

Polymorphism of Cyclin D1 and Expression of Cell Cycle Related Genes in Colorectal Carcinoma

目的:研究大肠癌中Cyclin D1基因DNA序列的多态性及其相关的细胞周期调控蛋白的表达水平。方法:取55例大肠癌患者手术切除标本,抽提病变组织中的基因组DNA,另取24例非癌症切除的正常组织作为正常对照。通过PCR扩增Cyclin D1的4号外显子的基因组DNA片段,并进行限制性片段长度多态性分析,统计Cyclin D1第242号密码子多态性的分布比例。以Western Blot方法,在蛋白质水平检测相应组织中Cyclin D1,Cdk6和pRb的表达水平及磷酸化水平。将检测结果以光密度值进行半定量,对比各组不同的Cyclin D1基因型对相关蛋白表达的影响。结果:在55例大肠癌中,有12例(21.8%)的基因型显示为GG;有24例(43.6%)的基因型显示为AG;有19例(34.5%)的基因型显示为AA。当其基因型为AA和AG时,Cyclin D1表达水平和pRb磷酸化水平要显著高于基因型为GG的标本(P<0.01)。一般GG型的肿瘤组织中Cyclin D1的表达水平和pRb磷酸化水平与正常组织无显著性差异;而AA和AG型的肿瘤组织中,Cyclin D1的表达水平则分别可以达到正常组织的(4.87±2.38)倍和(3.43±1.74)倍。病理学检测显示多数AA和AG型大肠癌的肿瘤分级也显著高于GG型的标本(P<0.05);但肿瘤分期的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:大肠癌中Cyclin D1基因第242号密码子具有多态性。Cyclin D1的等位基因多态性在很大程度上影响了pRb的磷酸化水平,与大肠癌病理分级以及预后有密切联系。