牲畜链霉菌一个调节基因的克隆及其顺式调控元件的研究

依据原核生物中广泛存在的调节基因ｌｕｘＩ保守性区域的氨基酸序列设计引物，以牲畜链霉菌总 ＤＮＡ为模板， ＰＣＲ扩增出约１８０ｂｐ片段．以此为探针，与总 ＤＮＡ不同酶切产物进行杂交，最终获得外源基因克隆至 ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（－） ＥｃｏＲＩ－ＢａｍＨＩ位点的重组质粒 ｐＳＮ１．序列分析发现一个 １８００ ｂｐ的完整 ＯＲＦ，（Ｇ＋Ｃ）％为 ６９． ３％，命名为ｓｃｔＩ． ＯＲＦ上游有 ２４９ｂｐ的 ＡＴ富集区，下游有复杂的二级结构．凝胶滞留实验证明 ＡＴ富集区有特异性的ＤＮＡ结合蛋白，且在低温聚丙烯酰胺凝胶电泳时可见“ＤＮＡ弯曲”现象，提示此ＡＴ富集区为一顺式调控元件。