与成肌细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞分化

目的通过不同比例的大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)与成肌细胞(skeletalmyoblast,SM)共培养,评价MSCs向SM分化的可行性。方法采用贴壁培养法获取纯化的MSCs,多步酶消化法并差速贴壁法获取纯化的SM,实验组采用第4代MSCs,经DAPI标记后与SM按2∶1、1∶1、1∶2的比例共培养,显微镜下观察细胞形态,共培养后第5天,通过细胞免疫荧光染色和RT-PCR方法检测成肌细胞特异性分子Desmin的表达情况。同时采用MSCs和SM单独培养作为阴性和阳性对照组。结果 (1)实验组细胞镜下形态与对照组无明显差异;(2)细胞免疫荧光染色显示实验组存在DAPI与Desmin双阳性细胞,在共培养第5天时可见MSCs分化率分别为(27.71±1.51)%、(36.77±0.97)%、(51.63±1.31)%,差异有统计学意义(P<0.05);(3)RT-PCR结果显示,共培养的SM比例越高,Desmin基因表达量越高。结论 MSCs与SM细胞共培养可以诱导其向SM分化,SM细胞比例越高,MSCs分化率越高。