聚氧乙烯辛烷基酚制备去细胞神经移植体

目的采用聚氧乙烯辛烷基酚(Triton X-100)去除周围神经中的雪旺细胞和髓鞘,制取天然神经细胞外基质,构建组织工程化神经移植体。方法健康新西兰大耳白兔30只,分别自梨状肌下缘水平以远切取10 mm双侧坐骨神经60根,随机分为A(12 h组)、B(24 h组)、C(48 h组)、D(96 h组)、E(1 w组)用于化学萃取,F(新鲜神经)为对照组。5组神经Triton X-100萃取时间分别为12 h、24 h、48 h、96 h、1 w。在新鲜神经和萃取后的神经中段分别切取1段2 mm神经,10%甲醛固定,常规石蜡包埋、纵形切片,行HE染色、磷钨酸苏木素(PTAH)染色、阿尔辛蓝(Alcianblue)染色、层黏连蛋白(Laminin)免疫组化染色。在光镜下对各组神经进行观察。结果光镜下对各组神经进行观察,新鲜神经可见雪旺细胞分布均匀,髓鞘、基底膜排列整齐。随着萃取时间的延长雪旺细胞、髓鞘逐渐减少,髓鞘与基底膜的界限不清,至96 h时神经雪旺细胞、髓鞘消失,纵切片上基底膜呈栅栏样排列,膜与膜之间为中空结构的基底膜管,萃取时间至1 w时,基底膜仍清晰,但由胶原纤维构成的管状结构排列疏散,不规则,部分有断裂。扫描电镜下观察,随着萃取时间延长,神经内的轴突、髓鞘逐渐减少,萃取时间至96 h时神经内的轴突、髓鞘已被完全去除,可见由胶原纤维构成的立体管状结构,胶原纤维仍维持原有的位置、形态及结构特征,管内并可见膜样结构。萃取时间为1 w时,由胶原纤维构成的立体管状结构与96 h的标本相似,但结构较之稍散乱,形成的管腔不规则。A～F组切片单位面积Lamiain平均灰度分别为:140.1±3.41;142.1±3.14;142.1±3.14;140.4±4.03;141.7±2.62;142.7±7.24,各组间无显著性差异(P=0.751)。结论用Triton X-100化学萃取方法是制备组织工程化神经移植体的有效方法。萃取人类长段粗大神经时,可适当延长萃取时间,不致破坏基底膜的主要成分层黏连蛋白。