一种改进的大鼠胎肝干细胞分离纯化方法

目的改进大鼠胎肝干细胞的分离纯化方法,提高肝脏干细胞分离的纯度和活力。方法采用剪碎酶消化法分离大鼠胎肝干细胞,差速离心结合选择性消化法进行进一步纯化,含10%优等胎牛血清的DMEM/F12培养液培养。利用免疫细胞化学方法分别检测P1和P10代肝干细胞表面标志物。结果分离的大鼠胎肝干细胞接种培养瓶24 h后开始贴壁,5 d后细胞体积增大,呈梭形或多边形。经1～2次差异性消化传代后,细胞呈集落样生长,边缘清晰且折光率强。免疫细胞化学检测示:P1代大鼠胎肝干细胞C-Kit、甲胎蛋白(AFP)抗原、OV6、细胞角蛋白(CK)19呈阳性表达,不表达Alb。P10代肝干细胞C-Kit、CK19、OV-6及CD34呈阳性表达。结论大鼠胎肝干细胞分离纯化、培养扩增及鉴定方法简单易行。