重组人乙酰胆碱受体α亚单位胞外域在CHO细胞中的表达

目的获得具有生物学活性的重组人烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)α1亚基胞外域(ECD)蛋白。方法从TE761细胞中提取人nAChRα1亚单位全长基因,以PCR法扩增nAChRα1亚基ECD1-216,酶切后装入pcDNA3.1表达载体中,脂质体转染入CHO细胞,分别在转染后6～72 h的7个时间点进行荧光实时定量PCR鉴定ECD基因的表达水平,利用125I标记的银环蛇毒素测定细胞培养上清中ECD蛋白的表达。结果 Hα1-216 PCR后所得708 bp片段大小符合预计结果,测序所得核苷酸序列与GenBank中人AChRα1序列完全一致。所构建的新载体经酶切鉴定目的基因正确插入,载体构建成功。随着细胞培养时间的延长ECD基因mRNA表达水平逐渐增加,且ECD蛋白表达水平也不断提高。结论在CHO细胞成功表达了具有生物学活性的重组人nAChRα1胞外域蛋白。