摘要
目的在GIRK4通道蛋白中加入FLAG标记短肽,并检测通道功能是否受到影响。方法运用聚合酶链式反应(PCR)技术合成带有FLAG标记的GIRK4通道片段,并将该片段插入至载体pGEMHE质粒DNA中。使用免疫印迹检测FLAG短肽是否与GIRK4通道蛋白融合,并使用双电极电压钳(two-microelectrodevoltageclamp,TEVC)检测通道的表达情况。结果经测序鉴定,确认成功构建了重组质粒DNA即FLAG-GIRK4-pGEMHE,使用双电极电压钳检测有通道电流。结论通过PCR技术成功构建重组质粒DNA,即FLAG-GIRK4-pGEMHE,且FLAG标记蛋白已稳定表达并且未影响GIRK4通道蛋白的功能,为今后研究GIRK4通道蛋白功能提供了简便途径。
出处
《中国中医药现代远程教育》
2012年第24期149-150,共2页
Chinese Medicine Modern Distance Education of China
基金
河北省卫生厅医学科学研究指导项目[No:20110513]
保定市科技局指导项目(10ZF065)
河北大学校内基金[No:2010Q39]