FLAG标记的GIRK4通道的构建、表达及其对GIRK4功能的影响

目的在GIRK4通道蛋白中加入FLAG标记短肽,并检测通道功能是否受到影响。方法运用聚合酶链式反应(PCR)技术合成带有FLAG标记的GIRK4通道片段,并将该片段插入至载体pGEMHE质粒DNA中。使用免疫印迹检测FLAG短肽是否与GIRK4通道蛋白融合,并使用双电极电压钳(two-microelectrodevoltageclamp,TEVC)检测通道的表达情况。结果经测序鉴定,确认成功构建了重组质粒DNA即FLAG-GIRK4-pGEMHE,使用双电极电压钳检测有通道电流。结论通过PCR技术成功构建重组质粒DNA,即FLAG-GIRK4-pGEMHE,且FLAG标记蛋白已稳定表达并且未影响GIRK4通道蛋白的功能,为今后研究GIRK4通道蛋白功能提供了简便途径。