HIV-1 gp120真核表达载体的构建及表达

目的模拟HIV-1包膜糖蛋白天然构象,在真核细胞中高效表达三聚体包膜糖蛋白。方法本研究以原代HIV-1分离株06044包膜为研究对象,将不含信号肽序列的包膜gp120基因克隆至含有人类组织型纤溶酶原激活物(tPA)的信号肽序列的真核表达载体上,构建单体形式gp120蛋白表达载体;或将其克隆至含有tPA信号肽序列和蛋白质三聚化模序MTQ的真核细胞表达载体上,构建三聚体形式gp120蛋白表达载体。gp120重组表达载体体外瞬时转染293T细胞,western blot检测表达情况。结果获得gp120蛋白单体和三聚体的真核细胞表达载体pcT.06044 gp120m/co和pcT.06044 gp120T/co;重组质粒瞬时转染293T细胞后western blot分析,在变性条件下,两组细胞培养上清均检测到单体形式gp120蛋白;非还原条件下,pcT.06044 gp120T/co转染组的细胞培养上清中检测到三聚体、二聚体和单体三种形式gp120蛋白,其百分比分别为76%、14%和10%。结论本研究成功构建了HIV-1原代06044株包膜gp120单体和三聚体表达载体,并在哺乳细胞中成功表达了gp120单体和三聚体蛋白。