摘要
在研究白鲢 /团头鲂遗传图谱时 ,对 RAPD反应中的模板浓度、引物浓度、d NTPs浓度、镁离子浓度等影响反应结果的因素进行了系统分析 ,并在些基础上建立了适于实验室 RAPD研究的最佳反应体系 :2 5μL反应体系中 ,含 1 0mmol/L Tris-HCl ( p H 8.0 )、 1 0 mmol/L KCl、 8mmol/L ( NH4) 2 SO4、 2 mmol/L Mg Cl2 、 0 .0 5%NP-4 0、 0 .2 mmol/Ld NTP、 1 5ng引物、 2 0 ng模板、 1 .5U Taq DNA聚合酶。热循环参数为 :95℃预变性 3 min,然后 94℃变性 1 min,3 6℃退火 1 min,72℃延伸 2 min,共 4 0个循环 ,最后 72℃延伸 6min。
The conditions for genetic mapping of Hypophthalmichthys molitrix/Megalobrama amblycephala in fishes were optimized. For a 25 μL reaction, the optimal composition included 10 mmol/L Tris HCl (pH 8.0), 10 mmol/L KCl, 8 mmol/L (NH 4) 2SO 4, 2 mmol/L MgCl 2, 0.05% NP 40, 0.2 mmol/L dNTP, 15 ng of random primers, 20 ng of template DNA and 1.5 U Taq DNA. The optimal program for efficient amplification included 40 cycles of denaturation at 94 ℃ for 1 min (95 ℃ for 3 min for the first cycle), annealing at 36 ℃ for 1 min and extension at 72 ℃ for 2 min (6 min for the final cycle).
