雌性乳鼠颅骨来源的成骨细胞培养方法的建立及其评价

Establishment of method to culture osteoblasts from female neonatal rat skull

目的:探讨建立乳鼠成骨细胞体外培养的最佳方案,为骨组织工程的研究提供稳定可靠的种子细胞来源。方法:用新出生(48h内)乳鼠颅骨,采用改良的胰蛋白酶及胶原酶两步消化法进行细胞体外培养,倒置显微镜观察细胞形态,对其碱性磷酸酶(ALP)活性及矿化能力进行鉴定,并绘制细胞生长曲线,观察成骨细胞的表型特征。结果:原代细胞接种24h后可见部分圆形细胞以散在的方式贴壁,48～72h完全贴壁伸展成饱满多角状,成多个集落;7～8d时,集落迅速增多;至10～15d约进入快速生长期,集落中心细胞密集,周围细胞呈放射状或旋涡状排列,细胞之间无接触抑制现象,集落间出现重叠;15～20d融合细胞重叠复层生长。传代培养的成骨细胞其形态呈现出不规则多角形,多为不规则三角形或四边形,表面有短而薄的突起。经苏木精染色观察、碱性磷酸酶染色及矿化结节的茜素红染色鉴定其具有完全的成骨细胞表型,确实为成骨细胞。结论:改良胶原酶及胰蛋白酶联合消化法能够在较短时间内获得高纯度的成骨细胞,有望成为骨组织工程种子细胞培养的常规方法。