尿液N-乙酰--D-氨基葡萄糖苷酶连续监测法测定

目的探讨2-氯-4-硝基苯-N-乙酰--D-氨基葡萄糖苷(CNP-NAG)为底物用连续监测法测定尿液NAG,并对其方法学进行评价。方法尿液中NAG作用于底物CNP-NAG水解游离出显色团对硝基酚(CNP),其生成速率与酶活力在一定范围内成正比,在405nm监测每分钟吸光度的变化,通过微摩尔吸光系数计算出NAG活力。结果本法最适PH为5.0,线性范围0～150u/L。批内CV3.86%(n25)批间CV4.67%(n25)平均回收率94%。与终点法对比测定结果相关性良好,Y(本法)=0.8492×(终点法)+0.6742=0.9834。结论用CNP-NAG为底物测定尿液NAG,反应后生成色源CNP,PKa为5.5,与酶的最适PH5.0接近,反应后即显色,通过连续监测△A/min,用微摩尔吸光系数计算出NAG活力,无需设样本空白,可进行自动化分析,使用方便。