日本乙型脑炎病毒贵州分离株NS1基因克隆及表达载体的构建

为了研究日本乙型脑炎病毒(JEV)NS1基因工程疫苗、生物免疫活性及细胞因子IL-2对真核表达的影响,试验采用RT-PCR方法扩增出JEV贵州分离株(GZ株)NS1 cDNA,克隆到pMD19-T载体上,再进行双酶切并回收目的片段,分别与pET32a(+)和pcDNA3.1(+)载体连接并转化入感受态细胞Top10中,构建原核表达载体pET32a(+)-NS1和真核表达载体pcDNA3.1(+)-NS1,并将NS1基因插入已经构建好的重组质粒pcDNA3.1(+)-IL-2上,构建以IL-2融合表达的真核载体pcDNA3.1(+)-IL-2-NS1,分别通过抽提阳性质粒酶切鉴定和测序后,应用DNAStar等生物软件进行序列分析,最后进行原核表达载体和真核表达载体双酶切及测序。结果表明:JEV GZ株NS1 cDNA全长为1 245 bp,可编码415个氨基酸。说明JEV GZ株NS1 cDNA克隆成功,JEV GZ株NS1基因的原核表达载体、真核表达载体以及IL-2融合表达的真核载体构建成功。