ASPP1蛋白抗体制备及ASPP1在结肠癌组织中的表达

目的制备ASPP1多克隆抗体,研究ASPP1在结肠癌组织中的表达,探讨其表达与结肠癌的组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移的关系,阐明ASPP1在结肠癌中的作用。方法根据生物信息学软件分析人ASPP1蛋白的二级结构、亲水性、疏水性和抗原性等理化性质,经同源性检索,综合考虑抗体设计的其他因素,设计一段多肽,制备多克隆抗体。利用ELISA、Western印迹、免疫组织化学方法测定其效价和特异性。应用免疫组化SP法检测30例结肠癌组织及15例正常结肠组织中的ASPP1表达,判定ASPP1表达与结肠癌的组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移等临床病理学特征的关系。结果成功分析预测ASPP1的抗原性;制备了抗人ASPP1多克隆抗体;利用ELISA、Western印迹和免疫组织化学染色方法证实此抗体效价较高,特异性较强。ASPP1在癌组织的高、中、低分化程度上的表达表现为分化程度越低,其表达越弱。在浸润深度及有无淋巴结转移中的表达无显著性差异,在结肠癌与正常结肠组织中比较无显著性差异(P>0.05)。结论利用生物信息学软件较好地预测出人ASPP1的抗原性,并成功制备了较高特异性的人ASPP1多克隆抗体。ASPP1的表达异常与结肠癌进展有关,其表达的失调在结肠癌的预后中发挥重要作用。