活化T细胞核因子非编码基因对人脐静脉内皮细胞调节作用的实验研究

Effects of noncoding RNA NRON gene regulation on human umbilical vein endothelial cells functions

目的探讨活化T细胞核因子非编码基因（noncodingrepressorofnuclearfactorofactivatedTcells，NRON）在人脐静脉内皮细胞内过表达和干扰后，对活化T细胞核因子（nuclearfactorofactivatedTcells，NFAT）基因表达的影响，并探讨其对人脐静脉内皮细胞生长、成管能力和迁移能力的影响。方法使NRON基因在人脐静脉内皮细胞中过表达，并使用短发夹RNA（shRNA）干扰培养成NRON过表达细胞系和shRNA干扰细胞系。各细胞系采用不同浓度的小牛血清（1％、2％、4％、8％和10％）处理48h，观察其细胞生长变化。以正常HUVEC细胞系作为对照，另设加入pBABE空载体细胞系和pSuper空载体细胞系作为对照。采用非放射性细胞增殖实验、内皮细胞成管实验、内皮细胞迁移实验这几种血管内皮细胞功能实验，检测血管内皮细胞基本特性的变化。结果非放射性细胞增殖实验结果显示，各细胞系采用不同浓度小牛血清处理48h，其细胞生长均与小牛血清浓度呈正相关（正常HUVEC细胞系r=0．91；pBABE空载体细胞系，r：0．88；NRON过表达细胞系，r=0．89；pSuper空载体细胞系，r=0．95；shRNA干扰细胞系，r=0．97）；与正常HUVEC细胞系和pBABE空载体细胞系比较，NRON过表达细胞系细胞增殖能力较低（各浓度P均〈0．05）；与正常HUVEC细胞系和pSuper空载体细胞系比较，shRNA干扰细胞系增殖能力较高（各浓度P均〈0．05）。细胞成管实验中，与正常HUVEC细胞系和pBABE空载体细胞系比较，NRON过表达细胞系细胞成管能力较低[分别为（23．33±3．01）条和（19．67±1．42）条比（8．33±0．12）条，P均〈0．05]；与正常HUVEC细胞系和pSuper空载体细胞系[（17．33±2．93）条]比较，shRNA干扰细胞系[（36．00±0．51）条]细胞成管能力则较高（P均〈0．05）。细胞迁移实验中，与正常HUVEC细胞系和pBABE空载体细胞系比较，NRON过表达细胞系细胞迁移数较少[分别为（5145±72）个和（441l±117）个比（1857±65）个，P均〈0．05]；与正常HUVEC细胞系和pSuper空载体细胞系[（3883±109）个]比较，shRNA干扰细胞系[（6987±50）个]细胞迁移数较多（P均〈0．05）。结论NRON基因过表达和shRNA干扰，分别使NFAT基因呈抑制或激活状态。NRON基因过表达可抑制人脐静脉内皮细胞生长，减弱其成管能力和细胞迁移能力。shRNA干扰NRON后可促进人脐静脉内皮细胞生长，增强其成管能力和细胞迁移能力。

Objective To determine the effects of noncoding repressor of NFAT （NRON） overexpression or silencing on human umbilical vein endothelial cells （HUVECs）functions. Methods Stable HUVECs cell lines with NRON overexpression and short hairpin RNA （ shRNA ） interference were obtained. HUVECs, the empty vector pBABE-cell line and the empty vector pSuper-cell line served as controls. Cell proliferations of these cell lines were tested using MTS method, tube formation capacity and migration function were also examined. Results MTS experiments evidenced dose-dependent cells proliferations in all cell lines after 48h culture with fetal bovine serum （HUVECs, r = 0. 91 ;pBABE empty vectors cell-line, r = 0. 88 ; NRON overexpression cell-line, r = 0.89 ; pSuper empty vectors cell-line, r = 0. 95 ;shRNA infererence cell-line, r = 0.97 ）. Proliferation capacity was lower in NRON overexpressed HUVECs and was higher in NRON silencing HUVECs compared with pBABE empty vectors treated and normal HUVECs （ all P 〈 0.05 ）. Tube formation and migration functions were also reduced in NRON overexpressed HUVECs [ （8.33 ±0. 12） roots, （1857 ±65） cells] and increased in shRNA infererenee of NRON treated HUVECs [ （36. 00 ±0. 51） roots, （6987 ±50） cells] compared with pBABE empty vectors treated HUVECs [ （ 19. 67± 1.42） roots, （4411 ±117） cells], pSuper empty vectors treated HUVECs [ （ 17.33± 2.93） roots, （3883± 109） cells ] and normal HUVECs [ （23.33 ± 3.01 ） roots, （ 5145 ±72） cells, all P 〈 0. 05 ]. Conclusion NRON overexpression could reduce and NRON silencing could increase proliferation, tube formation and migration capacities of HUVECs.