川芎嗪对人脐静脉内皮细胞缺氧相关因子表达的影响

Effect of tetramethypyrazine on hypoxia-related factors expression in human umbilical vein endothelial cells

目的观察川芎嗪（TMP）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）缺氧相关因子表达的影响。方法体外培养HUVECs，取2～5代细胞进行实验。将HUVECs分为对照组、氯化钻（CoCl2）缺氧组及50、100、200μmol／L TMP药物处理组。对照组不作任何处理。CoCl2缺氧组利用150μmol／L。的CoCl2干预HUVECs4h；50、100、200μmol／L TMP药物处理组在CoCl2干预HUVECs4h后，再加入不同浓度TMP继续培养8h。分别提取各组细胞RNA和总蛋白，采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT—PCR）和蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测脯氨酰羟化酶2（PHD2）、缺氧诱导因子-1a（HIF-1a）、血管内皮生长因子（VEGF）mRNA和蛋白的表达。结果实时RT—PCR检测结果显示，与对照组比较，CoCl2缺氧组PHD2mRNA表达下降（t=3．734），HIF-1a和VEGFmRNA表达升高（t=4．589、3．926），差异均有统计学意义（P〈O．05）。50、100、200ffmol／L。TMP药物处理组分别与CoCl。缺氧组比较，PHD2mRNA表达均升高（t=3．286、3．617、3．886），差异有统计学意义（P〈0．05）；HIF-1amRNA表达均无明显变化（t=1．025、0．726、-1．386），差异无统计学意义（P〉0．05）；VEGFmRNA表达均有所下降，但50μmol／L。TMP药物处理组与之差异无统计学意义（t=1．696，P〉0．05），100、200umol／L。TMP药物处理组与之差异有统计学意义（t=2．974、3．492，P％0．05）。Westernblot检测结果显示，与对照组比较，CoCl2缺氧组PHD2蛋白表达下降，差异有统计学意义（t=3．122，P〈0．05）；HIF-1a及VEGF蛋白表达均有不同程度升高，差异有统计学意义（t=3．778、3．257，P〈0．05）。50、100、200umol／L。TMP药物处理组分别与CoCl。缺氧组比较，PHD2蛋白表达均升高（t=2．813、3．026、3．078），差异有统计学意义（P％0．05）；HIF-1d、VEGF蛋白表达均有所下降，但50umol／L．TMP药物处理组与之差异无统计学意义（t=2．056、1．986，P〉0．05），100ffmol／L。TMP药物处理组（t=3．058、2．976）及200ffmol／L。TMP药物处理组（t=3．828、3．136）与之差异有统计学意义（P〈0．05）。结论TMP能上调缺氧HUVECs中PHD2mRNA和蛋白的表达，下调HIF-1“蛋白、VEGFmRNA和蛋白的表达。

Objective To observe the effect of tetramethypyrazine （TMP） on the expression of hypoxia-related factors in human umbilical vein endothelial cells （HUVECs）. Methods The second to fifth passage cultured HUVECs were divided into five groups： control group, CoC12-induced hypoxic group and 50, 100, 200 μmol/L TMP treatment groups. HUVECs in control group were not treated. HUVECs in CoCl2 induced bypoxic group were treated with 150 μmol/L COC12 for four hours. HUVECs in 50, 100, 200 μmol/L TMP treated groups were pretreated with 150 /,mol/L CoOl2 for four hours, followed by treatment with 50, 100, 200μmol/L TMP for eight hours. Real-time reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR） was used to detect the mRNA levels of prolyl hydroxylase 2 （PHD2）, hypoxia-induced factor-lc^（HIF-lcO and vascular endothelial growth factor （VEGF）. Protein levels of PHD2, HIF-I~, and VEGF were detected using Western blot. Results Compared with the control group, the COC12 induced hypoxic group showed decreased mRNA and protein levels of PHD2 （t=3. 734, 3. 122; P〈0.05）, while